RNA silencing di geni coinvolti nel controllo delle fasi precoci dello sviluppo del frutto di pomodoro (2005)

Starting date
January 1, 2005
Duration (months)
24
Departments
Biotechnology
Managers or local contacts
Spena Angelo
URL
2005057545_001
Keyword
SVILUPPO DEL FRUTTO;POMODORO;RNA SILENCING;ESPRESSIONE GENICA;FUNZIONE GENICA;INGEGNERIA GENETICA;BIOTECNOLOGIE VEGETALI

Il programma di ricerca utilizza metodiche di RNA silencing per studiare geni coinvolti nello sviluppo del frutto di pomodoro. Cinque cDNA, scelti sulla base della loro espressione durante fasi precoci dello sviluppo del frutto, saranno utilizzati per indurre RNA silencing in piante transgeniche. A tal fine costrutti genici a forcina saranno introdotti nel genoma di piante di pomodoro per produrre RNA a doppio filamento ed indurre il silencing specifico dei geni di interesse. Eventi indipendenti di trasformazione (T0) saranno pertanto caratterizzati a livello molecolare (Southern, northern) e fenotipico (es. sviluppo del frutto). L'analisi sarà estesa alla progenie dei trasformanti primari per dimostrare la cosegregazione del fenotipo con il gene introdotto presente nel T-DNA insieme al gene marcatore (resistenza alla kanamicina). In parallelo costrutti genici sintetici iperesprimenti il prodotto genico di interesse saranno introdotti in piante di pomodoro. I geni sintetici utilizzati codificano per la stessa proteina pur avendo un'omologia di sequenza nucleotidica inferiore al 65%. Tali geni sintetici permetteranno di evidenziare eventuali effetti fenotipici causati dall'iperespressione del gene di interesse. Inoltre saranno utilizzati in incroci con piante silenziate per causare la reversione delle modifiche causate allo sviluppo del frutto nelle piante silenziate. Questo secondo obiettivo dovrebbe essere possibile in quanto la bassa omologia a livello nucleotidico e la presenza di non oltre 5 basi consecutive identiche dovrebbero rendere l'RNA trascritto dal gene sintetico immune all'RNAi.

Sponsors:

Ministero dell'Istruzione dell'Università e della Ricerca
Funds: assigned and managed by the department
Syllabus: COFIN - Progetti di Ricerca di Interesse Nazionale

Project participants

Barbara Molesini
Associate Professor
Angelo Spena

Activities

Research facilities

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