Espressione seme specifica della GAD65 umana in piante di Arabidopsis thaliana, Medicago truncatula (2005)

Starting date
January 1, 2005
Duration (months)
24
Departments
Biotechnology
Managers or local contacts
Pezzotti Mario
URL
2005072040_001
Keyword
PIANTE PER LA PRODUZIONE DI BIO-FARMACEUTICI;GAD65;PROINSULINA;APOLIPROTEINA;TROMBOPOIETINA;ESPRESSIONE STABILE;ESPRESSIONE TRANSEUNTE;SEME;CLOROPLASTO

La produzione “in planta” di proteine ricombinanti di interesse farmaceutico ed industriale offre teoricamente grandi vantaggi di economicità e sicurezza. Quantità illimitate di proteine da utilizzare sia a scopi diagnostici che terapeutici possono essere prodotte attraverso le piante.

Lo scopo principale di questo progetto è di produrre“in planta” proteine ricombinanti per la diagnosi e la terapia di patologie umane, in rispetto della sicurezza alimentare e della tutela dell’ambiente.

In particolare il progetto verterà su:
a- la dimostrazione della possibilità di esprimere specifiche proteine ricombinanti “in planta”;
b- lo sviluppo di strategie, rispettose dell’ambiente e della sicurezza alimentare, per aumentare i livelli di espressione di proteine già espresse “in planta” a bassi livelli;
c- la produzione in planta di proteine ricombinanti umane con un “pattern” di glicosilazione simile a quello umano.

Il progetto studierà le seguenti molecole:

• l’Apolipoproteina (ApoA-I) e la Proinsulina (PROINS): due proteine umane mai espresse “in planta”;
• l’isoforma da 65 kDa della Decarbossilasi dell’acido glutammico (GAD65): proteina umana già espressa “in planta” ma a bassi livelli;
• la trombopoietina (TPO): proteina umana del sangue espressa “in planta”, di cui, però, non sono ancora state determinate le modificazioni post-traduzionali (glicosilazione).

Il progetto ha questi obiettivi specifici:
1) espressione di proteine ricombinanti mai espresse prima “in planta” (ApoA-I e PROINS);
2) compartimentazione dell'espressione di proteine ricombinanti (ApoA-I, GAD65, PROINS and TPO) nei semi di tabacco e di Arabidopsis thaliana e Medicago truncatula tramite l'utilizzo di promotori tessuto-specifici (seme) per aumentare l'accumulo e la stabilità della proteina;
3) produzione di piante transplastomiche di tabacco esprimenti alti livelli di proteine ricombinanti (ApoA-I, GAD65 e PROINS);
4) espressione transeunte di proteine ricombinanti (TPO, ApoA-I, GAD65 e PROINS) utilizzando vettori derivati dal virus vegetale PVX (Virus X della Patata);
5) espressione di una glicoproteina ricombinante (TPO) in due linee di tabacco transgeniche con un ""pattern"" di glicosilazione parzialmente ""umanizzato"".

Sponsors:

Ministero dell'Istruzione dell'Università e della Ricerca
Funds: assigned and managed by the department
Syllabus: COFIN - Progetti di Ricerca di Interesse Nazionale

Project participants

Linda Avesani
Temporary Assistant Professor
Luisa Bortesi
Mario Pezzotti
Full Professor

Activities

Research facilities