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La tecnica Southern-blot, basata sull'ibridazione tra acidi nucleici, e la metodica RT-PCR, basata sulla PCR, consentiranno allo studente di applicare concretamente, nell'analisi molecolare di piante transgeniche, le conoscenze acquisite nel modulo 2 di teoria.
1) SOUTHERN BLOT ANALISI SU PIANTE TRANSGENICHE: ESTRAZIONE DNA GENOMICO, QUANTIFICAZIONE, TAGLIO CON ENZIMI DI RESTRIZIONE, SEPARAZIONE DEI FRAMMENTI SU GEL DI AGAROSIO, TRASFERIMENTO SU SUPORTO SOLIDO PER CAPILLARITÀ, IMMOBILIZZAZIONE DEL DNA SUL FILTRO, MARCATURA DEL PROBE NON RADIOATTIVO, PREIBRIDAZIONE, IBRIDAZIONE, LAVAGGI, DETECTION DEGLI IBRIDI MEDIANTE CHEMIOLUMINESCENZA, ANALISI DEI RISULTATI
2) RT-PCR: ESTRAZIONE RNA, QUANTIFICAZIONE, TRATTAMENTO CON DNase, SINTESI DI cDNA, PCR
Consegna di una relazione dettagliata sulle esperienze svolte in laboratorio
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