Separazione di proteine su gel di poliacrilammide a pori templati.

Starting date
September 1, 2005
Duration (months)
12
Departments
Biotechnology
Managers or local contacts
Bossi Alessandra Maria

Il supporto più largamente impiegato per la separazione elettroforetica di proteine è la poliacrilammide, polimero fortemente idratato, che forma un gel. La dimensione dei pori e la struttura tridimensionale delle maglie del gel determinano l’intervallo di dimensioni molecolari separabili dal supporto. Per esempio, la separazione di proteine di dimensioni considerevoli, o di complessi proteici, presuppone pori larghi e un basso crosslinking del gel.
Sono state messe a punto differenti strategie per modificare le dimensioni dei pori, tra cui la polimerizzazione dei monomeri in presenza di PEG, il quale favorisce la segregazione dei fasci delle catene di gel nascente, e dunque permette di ottenere strutture a macropori [1, 2]. Gel a mesostruttura sono stati proposti tramite polimerizzazione dei monomeri in presenza di micelle sferiche di SDS [3].
Nel presente progetto, si propone di modificare la struttura dei gel di poliacrilammide, impiegando proteine per il templating dei pori. E’ stato dimostrato l’effetto stampo delle proteine su poliacrilammide in lavori di cromatografia, nonché si è dimostrata la selettività dei gel templati nel riconoscimento e legame della proteina templato [4]. Non è stato invece investigato il comportamento in campo elettrico dei gel templati. Pertanto, si prevede di polimerizzare i gel in presenza di templati con dimensioni molecolari diverse (da 10.000 a 200.000 Dalton). Si prevede di ottimizzare le condizioni di rimozione del templato. Si valuteranno le caratteristiche di separazione in campo elettrico dei gel a pori templati, usando una miscela di proteine test, di diverse sia per dimensione che per carica. Si valuterà la selettività del gel per la propria proteina templato in campo elettrico.



[1] Righetti PG, Caglio S, Saracchi M, Quaroni S, Electrophoresis 1992, 13, 587-92
[2] Asnaghi, D., Giglio, M., Bossi, A., Righetti, P.G.: Large-scale microsegregation in polyacrylamide gels (spinodal gels). J. Chem. Phys. 1995, 102, 9763-69.
[3] Rill RL, Locke BR, Liu Y, Dharia J, Van Winkle D.: Protein electrophoresis in polyacrylamide gels with templated pores. Electrophoresis. 1996, 17, 1304-12.
[4] Hjerten S, Liao JL, Nakazato K, et al.: Gels mimicking antibodies in their selective recognition of proteins Chromatographia 1997, 44, 227-234

Sponsors:

Ateneo
Funds: assigned and managed by the department
Syllabus: RICATENEO - Finanziamenti d'Ateneo per la Ricerca Scientifica

Project participants

Alessandra Maria Bossi
Associate Professor

Activities

Research facilities