Produzione e caratterizzazione di proteine ricombinanti (2007/2008)

Corso a esaurimento

Codice insegnamento
4S00203
Crediti
3
Coordinatore
Paola Dominici
L'insegnamento è organizzato come segue:
Modulo Crediti Settore disciplinare Periodo Docenti
Teoria 2 BIO/10-BIOCHIMICA 1° Sem Paola Dominici
Laboratorio 1 BIO/10-BIOCHIMICA 1° Sem Paola Dominici

Obiettivi formativi

Modulo: Teoria
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Obiettivo del corso e' quello di fornire conoscenze teoriche e pratiche sulle principali tecniche utilizzate per l'amplificazione, la purificazione e caratterizzazione di proteine ricombinanti.


Modulo: Laboratorio
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Le esercitazioni di laboratorio si propongono di fornire gli strumenti metodologici per affrontare il percorso che va dal clonaggio all’ottenimento di una proteina in forma purificata.

Programma

Modulo: Teoria
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CLONAGGIO: Scelta della proteina. Scelta del sistema di espressione. Scelta del vettore. Strategia di clonaggio.
ESPRESSIONE :
Espressione in E.coli : ottimizzazione dei livelli di espressione; miglioramento della solubilita’; miglioramento della stabilita’; diminuzione della tossicita’ . Co-espressione.
Proteine di fusione: GST, (His)6 : vantaggi e svantaggi
Espressione in cellule di insetto/ baculovirus.
Espressione in lievito
PURIFICAZIONE:
Estrazione e chiarificazione . Cromatografia. Conservazione della proteina purificata.
CARATTERIZZAZIONE:
Determinazione quantita’ e concentrazione della proteina. Spettroscopia nella caratterizzazione di proteine. Caratterizzazione di proteine enzimatiche.


Modulo: Laboratorio
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Verranno espresse in E.coli e purificate una o piu’ proteine wt e/o mutate da Arabidopsis thaliana, mettendo in diretto contatto le esercitazioni di laboratorio con il lavoro di ricerca che si svolge nel laboratorio di Biochimica .

Modalità d'esame

Modulo: Teoria
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Lo studente dovrà fare una relazione per ogni esercitazione di laboratorio, da presentare all’esame. L’esame sarà orale, e comprenderà, oltre alla trattazione di alcuni argomenti teorici, piu’domande sui laboratori.


Modulo: Laboratorio
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Lo studente dovrà fare una relazione per ogni esercitazione di laboratorio, da presentare all’esame. L’esame sarà orale, e comprenderà, oltre alla trattazione di alcuni argomenti teorici, piu’domande sui laboratori.