Produzione e caratterizzazione di proteine ricombinanti (2005/2006)

Corso a esaurimento

Codice insegnamento
4S00203
Crediti
3
Coordinatore
Paola Dominici
L'insegnamento è organizzato come segue:
Modulo Crediti Settore disciplinare Periodo Docenti
Teoria 2 BIO/10-BIOCHIMICA 2° sem Paola Dominici
Laboratorio 1 BIO/10-BIOCHIMICA 2° sem Paola Dominici

Obiettivi formativi

Obiettivo del corso e' quello di fornire conoscenze teoriche e pratiche sulle principali tecniche utilizzate per l'amplificazione, la purificazione e caratterizzazione di proteine ricombinanti.
Le esercitazioni di laboratorio si propongono di fornire gli strumenti metodologici per affrontare il percorso che va dal clonaggio all’ottenimento di una proteina in forma purificata.

Programma

Modulo: Laboratorio
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Verranno espresse in E.coli e purificate una o piu’ proteine wt e/o mutate da Arabidopsis thaliana, mettendo in diretto contatto le esercitazioni di laboratorio con il lavoro di ricerca che si svolge nel laboratorio di Biochimica .


Modulo: Teoria
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CLONAGGIO: Scelta della proteina. Scelta del sistema di espressione. Scelta del vettore. Strategia di clonaggio.
ESPRESSIONE :
Espressione in E.coli : ottimizzazione dei livelli di espressione; miglioramento della solubilita’; miglioramento della stabilita’; diminuzione della tossicita’ . Co-espressione.
Proteine di fusione: GST, (His)6 : vantaggi e svantaggi
Espressione in cellule di insetto/ baculovirus.
Espressione in lievito
PURIFICAZIONE:
Estrazione e chiarificazione . Cromatografia. Conservazione della proteina purificata.
CARATTERIZZAZIONE:
Determinazione quantita’ e concentrazione della proteina. Spettroscopia nella caratterizzazione di proteine. Caratterizzazione di proteine enzimatiche.

Modalità d'esame

Lo studente dovrà fare una relazione per ogni esercitazione di laboratorio, da presentare all’esame. L’esame sarà orale, e comprenderà, oltre alla trattazione di alcuni argomenti teorici, piu’domande sui laboratori.