Tecniche di colture cellulari (2006/2007)

Corso disattivato non visibile

Codice insegnamento
4S00096
Crediti
6
Coordinatore
Antonella Furini
L'insegnamento è organizzato come segue:
Modulo Crediti Settore disciplinare Periodo Docenti
Cellule animali 2 BIO/13-BIOLOGIA APPLICATA 2° Sem Chiara Dalla Pellegrina
Cellule vegetali 2 AGR/07-GENETICA AGRARIA 2° Sem Antonella Furini
Laboratorio di cellule vegetali 2 Vedi pagina del modulo Vedi pagina del modulo

Obiettivi formativi

Obiettivi complessivi del corso riguardano l'acquisizione delle conoscenze di base per la propagazione e la manipolazione delle cellule eucariotiche e delle problematiche concernenti la realizzazione di saggi biologici applicati alle tecnologie ricombinanti e all'analisi della tossicita'.

Programma

Modulo: Cellule vegetali
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Lezioni frontali:
Organizzazione del laboratorio: area e strumenti per la preparazione dei mezzi di coltura. Coltura asettica. Metodi di sterilizzazione. Cappa a flusso laminare, camera di crescita e controllo dei fattori ambientali.
Composizione dei mezzi di coltura. Preparazione degli espianti, sterilizzazione, inoculo e trasferimenti. Influenza del tipo di espianto sulla crescita e lo sviluppo, influenza dei fattori fisici sulla crescita e lo sviluppo. Trasferimento dal mezzo di coltura al suolo.
Embriogenesi somatica, concetto di differenziamento e dedifferenziamento. Organogenesi diretta e indiretta. Coltura di calli, di cellule in sospensione. Coltura di protoplasti e ibridi somatici. Produzione di aploidi in vitro. Micropropagazione. Variazione somaclonale.
Trasformazione genetica per mezzo dell’agrobatterio, con metodo biolistico e per infiltrazione. Produzione di proteine eterologhe. Piante transgeniche e impatto ambientale.


Modulo: Cellule animali
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Modulo: Cellule animali
La cellula animale
• Vantaggi e svantaggi delle colture di cellule animali rispetto alla
sperimentazione con animali
• Colture primarie e il limite di Hayflick
• Trasformazione cellulare per l’ottenimento di linee stabilizzate
• Strumentazione e reagenti per le colture di cellule animali.
Composizione dei principali terreni. Sieri animali e terreni sintetici.
• La contaminazione delle colture. Il rischio biologico associato alla
manipolazione di cellule umane e le fondamentali procedure biohazard da
utilizzare nel laboratorio
• Modelli qualitativi e quantitativi per la sperimentazione. Cenni sulla
teoria statistica di Poisson. Applicazioni della teoria di Poisson negli
esperimenti di diluizione limite
• Clonaggio di cellule per la produzione di anticorpi monoclonali.
Quantificazione delle plasmacellule in vivo. Quantificazione del
potenziale clonogenico di una popolazione di cellule tumorali
• Coltura di cellule su feeder layer. Colture massive in mini-bioreattori
per la produzione di anticorpi monoclonali e di proteine in genere.
• Tecniche di immunofenotipizzazione.
• Tecniche fluorimetriche e strumentazione per l’analisi della
fluorescenza: il citofluorimetro, la microscopia confocale e la
fluorimetria per micropiastre
• Preparazione ed esecuzione di un esperimento con cellule animali: conta
cellulare e stima della vitalita’ del campione, saggi di citotossicita’,
misure della morte cellulare programmata e della necrosi
• Uso di cellule umane differenziate o differenziabili in vitro. Misure
elettriche e di permeabilita’
• Coltura di cellule tumorali in 3 dimensioni: morfologia e proprieta’,
saggi di citotossicita’
• Cellule staminali embrionali ed adulte. Tecniche di isolamento e
purificazione e loro possibili applicazioni


Modulo: Laboratorio di cellule vegetali
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Preparazione dei mezzi di coltura, sterilizzazione in autoclave e per filtrazione. Sospensioni cellulari ed embriogenesi somatica. Organogenesi diretta e indiretta. Micropropagazione da bulbo, stelo e foglia. Preparazione di protoplasti. Trasformazione genetica ed analisi di piante transgeniche.

Modalità d'esame

Modulo: Cellule vegetali
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Prova orale e relazione scritta relativa ai risultati ottenuti dagli esperimenti di laboratorio


Modulo: Cellule animali
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Alla fine del corso lo studente dovra’ sostenere un esame scritto


Modulo: Laboratorio di cellule vegetali
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Prova orale e relazione scritta relativa ai risultati ottenuti dagli esperimenti di laboratorio.

Offerta formativa