Il corso si propone di fornire un’appropriata conoscenza delle tecniche e metodologie avanzate nell’ambito della ricerca e della diagnostica. In particolare il corso tratta i microarray di acidi nucleici, i marcatori molecolari e le tecniche di genotyping, i metodi molecolari avanzati per l’analisi dell’espressione genica, le tecniche avanzate di PCR applicate al clonaggio genico nell’era post-genomica.
Programma del corso di Biotecnologie genetiche (2004/2005)
LA TECNOLOGIA GATEWAY®
• Reazioni di ricombinazione BP e LR
• Gateway® Entry Vector
• Gateway® Destination Vector
METODOLOGIE BASATE SULLA PCR
• Mutagenesi random e sitodiretta
• cDNA Amplification Using One-Sided, Anchored, PCR (RACE)
o Amplificazione di regioni a valle (3’) della sequenza conosciuta
o Amplificazione di regioni a monte (5’) della sequenza conosciuta
o Get the 5'-End: la NEW-RACE (RML-RACE)
o SMART™ RACE
• RT-PCR competitiva
• Thermal Asymmetric Interlaced PCR (TAIL)
• Amplification of insertion mutagenised sites (AIMS)
• Transposon Tagging
REAL TIME PCR
• TaqMan - Real-Time Quantitative PCR
• SYBR. Green I Dye Chemistry
• LUX Real-time or quantitative PCR
• Amplifluor™ Universal Detection System
MARCATORI MOLECOLARI
• DNA markers based on variable numbers of short sequence repeats
o VNTR
o Microsatelites
• DNA markers based on single nucleotide polymorphisms
o SNP
o Restriction Fragment Length Polymorhisms (RFLP's)
o RAPD
o SCAR
o AFLP
METODI PER LA GENETICA INVERSA
Cos’è la reverse genetics
RNA antisenso
Co-soppressione
RNA interfeering
Mutagenesi da inserzione:
T-DNA
Trasposoni
METODOLOGIE AVANZATE PER L’ANALISI DELL’ESPRESSIONE GENICA
• Librerie cDNA sotrattive
• Differential Display
• AFLP-Based Transcript Profiling
• SAGE (Serial Analysis of Gene Expression)
• Massively Parallel Signature Sequencing (MPSS)
• EST e electronic northern
• Macroarray
• Microarray
L'esame consiste in una valutazioe orale del grado di preparazione dello studente sugli argomenti descritti nel programma del corso
