Cellular Culture Techniques - modulo animale (2004/2005)

Learning outcomes

Scopo del corso e’ fornire allo studente una panoramica delle moderne tecniche di coltura delle cellule animali e dell’utilizzo delle colture per la produzione e per la valutazione dell’attivita’ biologica di molecole di interesse biotecnologico. Il corso intende inoltre fornire allo studente alcuni cenni sull’uso delle colture cellulari in biomedicina con particolare riferimento alle colture delle cellule staminali.

Programma del corso:

• La cellula animale
• Vantaggi e svantaggi delle colture di cellule animali rispetto alla sperimentazione con animali
• Colture primarie e il limite di Hayflick
• Trasformazione cellulare per l’ottenimento di linee stabilizzate
• Strumentazione e reagenti per le colture di cellule animali. Composizione dei principali terreni. Sieri animali e terreni sintetici.
• La contaminazione delle colture. Il rischio biologico associato alla manipolazione di cellule umane e le fondamentali procedure biohazard da utilizzare nel laboratorio
• Modelli qualitativi e quantitativi per la sperimentazione. Cenni sulla teoria statistica di Poisson. Applicazioni della teoria di Poisson negli esperimenti di diluizione limite
• Clonaggio di cellule per la produzione di anticorpi monoclonali. Quantificazione delle plasmacellule in vivo. Quantificazione del potenziale clonogenico di una popolazione di cellule tumorali
• Coltura di cellule su feeder layer. Colture massive in mini-bioreattori per la produzione di anticorpi monoclonali e di proteine in genere.
• Tecniche di immunofenotipizzazione.
• Tecniche fluorimetriche e strumentazione per l’analisi della fluorescenza: il citofluorimetro, la microscopia confocale e la fluorimetria per micropiastre
• Preparazione ed esecuzione di un esperimento con cellule animali: conta cellulare e stima della vitalita’ del campione, saggi di citotossicita’, misure della morte cellulare programmata e della necrosi
• Uso di cellule umane differenziate o differenziabili in vitro. Misure elettriche e di permeabilita’
• Coltura di cellule tumorali in 3 dimensioni: morfologia e proprieta’, saggi di citotossicita’
• Cellule staminali embrionali ed adulte. Tecniche di isolamento e purificazione e loro possibili applicazioni

Alla fine del corso lo studente dovra’ sostenere un esame scritto a “domande aperte