Attività | Crediti | Periodo | Docenti | Orario |
---|---|---|---|---|
Teoria | 2 | II semestre | Massimo Delledonne | |
Laboratorio | 6 | II semestre | Diana Bellin, Sara Zenoni |
Teoria
Scopo del corso è quello di contribuire a fornire un’appropriata conoscenza delle metodiche molecolari e affinare le capacità dello studente di applicarle in situazioni concrete. L’obiettivo formativo primario è quindi rappresentato dall’apprendimento delle metodologie necessarie allo svolgimento delle più comuni pratiche di manipolazione del DNA che un biotecnologo sarà chiamato a svolgere. In particolare il corso tratta le principali tecniche di purificazione degli acidi nucleici, la loro separazione mediante elettroforesi, la manipolazione del DNA e le metodologie per clonaggio in vettori batterici.
E' prevista l'applicazione delle principali tecniche di purificazione del DNA plasmidico e genomico, la separazione del DNA mediante elettroforesi su gel di agarosio, la sua digestione con enzimi di restrizione, la preparazione di costrutti genici e la loro trasformazione in E. coli.
Fornire allo studente conoscenze riguardo la teoria dell'ibridazione tra acidi nucleici e la teoria della PCR, su cui trovano fondamento molte tecniche di biologia molecolare.
Laboratorio
Scopo del corso è quello di contribuire a fornire un’appropriata conoscenza delle metodiche molecolari e affinare le capacità dello studente di applicarle in situazioni concrete. L’obiettivo formativo primario è quindi rappresentato dall’apprendimento delle metodologie necessarie allo svolgimento delle più comuni pratiche di manipolazione del DNA che un biotecnologo sarà chiamato a svolgere. In particolare il corso tratta le principali tecniche di purificazione degli acidi nucleici, la loro separazione mediante elettroforesi, la manipolazione del DNA e le metodologie per clonaggio in vettori batterici.
E' prevista l'applicazione delle principali tecniche di purificazione del DNA plasmidico e genomico, la separazione del DNA mediante elettroforesi su gel di agarosio, la sua digestione con enzimi di restrizione, la preparazione di costrutti genici e la loro trasformazione in E. coli.
Teoria
Plasmidi, Cosmidi, Batteriofagi, YAC e BAC
Scelta del plasmide vettore, markers selezionabili, siti di restrizione
Preparazione DNA plasmidico
Purificazione e separazione degli acidi nucleici
Estrazione DNA genomico
Estrazione di RNA
Corsa elettroforetica su gel di agarosio e quantificazione
Manipolazione del DNA e clonaggio
Caratteristiche e strategie d’uso dei vettori di clonaggio
Clonaggio in E. coli
Digestione con enzimi di restrizione
Recupero frammenti DNA da gel di agarosio e da soluzione
Defosforilazione vettore
Ligatura
Preparazione cellule competenti
Trasformazione
Analisi cloni ricombinanti
PCR
Definizione, descrizione di un ciclo universale, PCR su DNA genomico, RT-PCR, protocollo di retro trascrizione one-step e two-steps
Ibridazione molecolare
Southern Blot
Northern Blot
Laboratorio
Preparazione e quantificazione di DNA plasmidico
Preparazione e quantificazione di DNA genomico
Preparazione e quantificazione di RNA totale
Separazione del DNA a dell'RNA mediante elettroforesi su gel di agarosio
Clonaggio:
Digestione con enzimi di restrizione
Recupero frammenti DNA da gel di agarosio e da soluzione
Defosforilazione vettore
Ligatura
Preparazione cellule competenti
Trasformazione
Analisi cloni ricombinanti, PCR da colonia
Analisi PCR su DNA genomico
Analisi RT-PCR: quantificazione, trattamento con DNAse, sintesi cDNA e PCR su cDNA per la valutazione dell’espressione genica
Valutazione del grado di preparazione mediante colloquio
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