Cellular Culture Techniques - modulo vegetale (2004/2005)

Learning outcomes

Il corso introduce i concetti generali delle colture cellulari vegetali. Tratta l’utilizzo di ormoni per il differenziamento e dedifferenziamento delle cellule in vitro. Obiettivo del corso e’ altresi’ l’applicazione biotecnologica delle colture cellulari come la trasformazione genetica e la produzione di proteine eterologhe.

Lezioni frontali:
Organizzazione del laboratorio: area e strumenti per la preparazione dei mezzi di coltura. Coltura asettica. Metodi di sterilizzazione. Cappa a flusso laminare, camera di crescita e controllo dei fattori ambientali.
Composizione dei mezzi di coltura. Preparazione degli espianti, sterilizzazione, inoculo e trasferimenti. Influenza del tipo di espianto sulla crescita e lo sviluppo, influenza dei fattori fisici sulla crescita e lo sviluppo. Trasferimento dal mezzo di coltura al suolo.
Embriogenesi somatica, concetto di differenziamento e dedifferenziamento. Organogenesi diretta e indiretta. Coltura di calli, di cellule in sospensione. Coltura di protoplasti e ibridi somatici. Produzione di aploidi in vitro. Micropropagazione. Variazione somaclonale.
Trasformazione genetica per mezzo dell’agrobatterio, con metodo biolistico e per infiltrazione. Produzione di proteine eterologhe. Piante transgeniche e impatto ambientale.
Laboratorio:
Preparazione dei mezzi di coltura, sterilizzazione in autoclave e per filtrazione.
Sospensioni cellulari, embriogenesi somatica.
Organogenesi diretta e indiretta.
Micropropagazione da bulbo, stelo, foglia e radice.
Preparazione di protoplasti.
Trasformazione genetica e analisi di piante transgeniche.

Prova orale e relazione scritta relativa ai risultati ottenuti dagli esperimenti di laboratorio