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Scopo del corso è quello di contribuire a fornire un’appropriata conoscenza delle metodiche molecolari e affinare le capacità dello studente di applicarle in situazioni concrete. L’obiettivo formativo primario è quindi rappresentato dall’apprendimento delle metodologie necessarie allo svolgimento delle più comuni pratiche di manipolazione di DNA e RNA che un biotecnologo sarà chiamato a svolgere, integrando le conoscenze acquisite con gli elementi necessari per delineare principi e mettere a punto strategie e metodologie di interventi genetici e biotecnologici. In particolare il corso tratta le principali tecniche di purificazione degli acidi nucleici da microrganismi, da vegetali e da matrici complesse, la loro separazione mediante elettroforesi, la manipolazione del DNA e le metodologie per clonaggio in vettori batterici, virali e di lievito.
1- Purificazione del DNA
Preparazione DNA plasmidico
Preparazione DNA genomico
2- Separazione degli acidi nucleici mediante elettroforesi su gel di agarosio
3- Manipolazione del DNA e clonaggio
Digestione con enzimi di restrizione
Recupero frammenti DNA da gel di agarosio
Defosforilazione vettore
Ligatura
Preparazione cellule competenti
Trasformazione
esame orale
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