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Corso pratico di analisi dell'espressione genica in cellule e tessuti attraverso la tecnica di IBRIDAZIONE IN SITU.
Durante il laboratorio verranno condotte le seguenti esperienze:
-fissazione ed inclusione in paraffina di materiale biologico;
-preparazione di sezioni su vetrino mediante utilizzo di microtomo;
-rimozione della paraffina e idratazione dei campioni;
-preparazione di sonde di RNA marcato con digossigenina, mediante trascrizione in vitro partendo dal costrutto di interesse clonato in apposito vettore in E.coli;
-tecniche di controllo della bontà della sonda;
-ibridazione in situ con la sonnda e i campioni prepapati precedentemente;
-rivelazione degli ibridi RNA-RNA su vetrino mediante utilizzo di anticorpo anti digossigenina coniugato con fosfatasi alcalina, e opportuna reazione con i substrati delle'enzima stesso (NBT/BCIP);
-osservazione dei preparati al microscopio ottico e studio dell'espressione del gene scelto.
Domanda attinente alle esepreinze svolte durante l'esame del corso teorico di Biotecnologie Cellulari
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