Produzione e caratterizzazione di proteine ricombinanti - Teoria (2006/2007)

Corso a esaurimento

Codice insegnamento
4S00203
Docente
Paola Dominici
crediti
2
Settore disciplinare
BIO/10 - BIOCHIMICA
Lingua di erogazione
Italiano
Periodo
2° Sem dal 1-mar-2007 al 8-giu-2007.

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Orario lezioni

2° Sem
Giorno Ora Tipo Luogo Note
giovedì 9.30 - 11.30 lezione Aula M dal 8-mar-2007  al 8-giu-2007
venerdì 9.30 - 11.30 lezione Aula M dal 8-mar-2007  al 11-mag-2007

Obiettivi formativi

Obiettivo del corso e' quello di fornire conoscenze teoriche e pratiche sulle principali tecniche utilizzate per l'amplificazione, la purificazione e caratterizzazione di proteine ricombinanti.

Programma

CLONAGGIO: Scelta della proteina. Scelta del sistema di espressione. Scelta del vettore. Strategia di clonaggio.
ESPRESSIONE :
Espressione in E.coli : ottimizzazione dei livelli di espressione; miglioramento della solubilita’; miglioramento della stabilita’; diminuzione della tossicita’ . Co-espressione.
Proteine di fusione: GST, (His)6 : vantaggi e svantaggi
Espressione in cellule di insetto/ baculovirus.
Espressione in lievito
PURIFICAZIONE:
Estrazione e chiarificazione . Cromatografia. Conservazione della proteina purificata.
CARATTERIZZAZIONE:
Determinazione quantita’ e concentrazione della proteina. Spettroscopia nella caratterizzazione di proteine. Caratterizzazione di proteine enzimatiche.

Modalità d'esame

Lo studente dovrà fare una relazione per ogni esercitazione di laboratorio, da presentare all’esame. L’esame sarà orale, e comprenderà, oltre alla trattazione di alcuni argomenti teorici, piu’domande sui laboratori.