Chemistry and Analytical Biochemistry - Biochimica analitica - teoria (2005/2006)

Learning outcomes

Il corso si propone di fornire agli studenti la conoscenza
dei fondamenti delle metodologie biochimiche per l'analisi di proteine di più largo utilizzo, unitamente ai principi di funzionamento degli strumenti utilizzati.

Purificazione delle proteine: metodi di rottura delle cellule. Metodi di solubilizzazione delle proteine.
Metodi colorimetrici e spettroscopici applicati alla determinazione della concentrazione proteica.
Metodi spettroscopici e spettrofluorimetria applicati allo studio delle strutture terziaria e quaternaria di proteine e agli stati di associazione tra macromolecole.

Metodi cromatografici applicati alla purificazione di proteine. Cromatografia a scambio ionico. Cromatografia ad esclusione molecolare. Cromatografia di affinità: immunoaffinità, metal chelate, dye-affinity, covalente.

Metodi elettroforetici applicati al controllo della purezza dei preparati proteici e di acidi nucleici. Gel di agarosio. Gel di poliacrilamide. SDS gel elettroforesi. Gel in gradiente di porosità. Isoelettrofocalizzazione. Gel elettroforesi bidimensionale. Colorazioni. Western blotting. Gel elettroforesi di DNA. Elettroforesi capillare di peptidi, proteine e DNA.

orale